土壤中性磷酸酶(S-NP)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
土壤磷酸酶是催化土壤有機磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH的顯著影響,根據(jù)適PH范圍,一般把土壤磷酸酶分為中性、酸性和堿性三種類型。
測定原理:
中性環(huán)境中,S-NP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過測定酚的生成量即可計算出NP活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。
催化反應(yīng):
稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g,加入50μL甲苯(自備),輕搖15min;加400μL試劑一并且搖勻后,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱,開始計時,催化反應(yīng)24h;到時后迅速加入1mL試劑二充分混勻,以終止酶催化的反應(yīng)。8000g,25℃離心10min,取上清液置于冰上待測。
顯色反應(yīng):
1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到660 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶標板,加入10μL蒸餾水,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后25℃靜置30min,于660nm測定吸光度,記為A空白管。
3. 標準管:取微量玻璃比色皿/酶標板,加入10μL標準液,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后25℃靜置30 min,于660nm測定吸光度,記為A標準管。
4. 測定管:取微量玻璃比色皿/酶標板,加入10μL上清液,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后室溫25℃30 min,于660nm測定吸光度,記為A測定管。
注意:空白管和標準管只需測定一次。
