產品及特點：
馬鈴薯 Y 病毒病又稱脈帶病、脈斑病毒病。由于病毒株系不同而表現(xiàn)出不同癥狀。主要有脈帶花葉型、脈斑型和褪綠斑點型。脈帶型在煙株上部葉片呈黃綠花葉斑駁，脈間色淺，葉脈兩側深綠，形成明顯的脈帶，嚴重時出現(xiàn)卷葉或灼斑，葉片成熟不正常，色澤不均，品質下降，煙株矮化。脈斑型下部葉片發(fā)病，葉片黃褐，主側脈從葉基開始呈灰黑或紅褐色壞死，葉柄脆，摘下可見維管束變褐，莖稈上現(xiàn)紅褐或黑色壞死條紋。褪綠斑點型初期與脈帶型相似，但上部葉片現(xiàn)褪綠斑點，后中下部葉產生褐色或白色小壞死斑，病斑不規(guī)則，嚴重時整葉斑點密集，形成穿孔或脫落。馬鈴薯 Y 病毒病：煙株發(fā)病初期出現(xiàn)明脈，不久形成花葉型的斑駁，隨后小葉脈間顏色變淡，葉脈兩側的組織呈深綠色帶狀。受壞死株系侵染的病株，葉脈呈褐色至黑色壞死。本產品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的馬鈴薯病毒 Y 型檢測的試劑盒。
1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據(jù)馬鈴薯病毒Y型的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。
規(guī)格及成分：
|
編號 |
成分 |
規(guī)格 |
|
試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
|
試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋） |
|
試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
|
試劑四 |
馬鈴薯病毒Y型 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
|
試劑五 |
馬鈴薯病毒Y型 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
|
試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
馬鈴薯病毒Y型RT-PCR試劑盒
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 馬鈴薯病毒Y型 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡Ｖ苽渌贸蔀闃悠?RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
|
成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
|
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
|
馬鈴薯病毒Y型 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
|
N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
|
超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
|
馬鈴薯病毒Y型 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
|
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
|
過程 |
溫度 |
時間 |
|
逆轉錄 |
42℃ |
30 min |
|
預變性 |
95℃ |
5 min |
|
PCR 反應35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
|
58℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
20 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。